操作流程:
1.先以PCR方式於目標基因 (GOI) 上加入4個 Base 的重組序列;
2.將目標基因送入 Entry Vector 成為 Donor Vector;
3.藉由其上的重組序列,可再轉殖到數種不同基因背景的 Acceptor Vectors
得到多種 Destination Vectors;
4.送到相對應之寄主細胞進行實驗。
↑ 轉殖效率 > 99% ↑ 不同長度的目標基因皆能達到極佳的轉殖效率
Vectors | 宿主 | 特點 |
pASG-IBA | E. coli. | 具 tetA promoter/operator ,可以 AHT 誘導反應 具 ompA signal sequence 可用於 periplasmic 表現 於多種 E.coli 株皆可大量表現,也可應用於毒性蛋白之研究 |
pPSG-IBA | E. coli. | 具 T7 promoter, 適用於 in vitro 轉錄及轉譯反應 |
pESG-IBA | Mammalian Cells | 具 CMV promoter , 可持續表現 具 BM40 可用於分泌蛋白 |
pYSG-IBA | Yeast | 具CUP1 promoter , 可以銅誘導表現 |
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2019年9月25日